呋喃唑酮ELISA檢測試劑盒
Product No. 515655
概述
這個呋喃唑酮ELISA檢測試劑盒用于定量檢測樣品中的呋喃唑酮代謝產物的含量。如果要確證，可以采用傳統的檢測方法如：HPLC, GC/MS。
原理
這個呋喃唑酮（AOZ）ELISA檢測試劑盒的原理是酶聯免疫，應用于測定呋喃唑酮。在微孔中加入標準和樣品，再加入AOZ-HRP酶結合物，微孔板包被有呋喃唑酮（AOZ）特異性抗體。這時樣品中的呋喃唑酮和呋喃唑酮酶結合物競爭于包被在微孔板上的呋喃唑酮抗體結合。這個反應進行30min。經過洗板步驟，加入底物（顯色劑）。通過顯色劑來檢測呋喃唑酮。底物（顯色劑）含有雙氧水和TMB。結合到呋喃唑酮抗體上的AOZ-HRP酶結合物催化底物產生有色物質。經過一個反應期加入稀酸（終止液）終止反應。用酶標儀讀數。通過繪制標準曲線來測定樣品中AOZ的含量。因為AOZ-HRP酶結合物和樣品中的AOZ是競爭關系所以顯色的深淺和樣品中呋喃唑酮的含量成反比。
性能數據
敏感性：魚、蝦、雞 0.1 ppb；混合飼料 0.3 ppb
選擇性：這個試劑盒只能測呋喃唑酮不能測定類似的化合物
樣品：需要通過處理樣品來消除基質效應
標準曲線：測定時靠近曲線的中間部位取值更為準確。
重復性：標準的變異系數(CVs) <10%；樣品的變異系數(CVs) <15%；
交叉反應：
Furazolidone (AOZ) 100%
Furaltadone (AMOZ) <0.01%
Semicarbazide (SEM) <0.01%
1-aminohydantoin (AHD) <0.01%
試劑盒組成
1、真空包裝微孔板（12×8條），包被有AOZ抗體
2、7瓶呋喃唑酮標準液，濃度分別為0, 0.0125, 0.025, 0.05, 0.1, 0.2, 和0.5 ppb, 每瓶1ml。（已經衍生化）
3、呋喃唑酮-HRP酶標記物 12ml
4、樣品處理緩沖液（10X ）濃縮，50ml，用于稀釋樣品。
5、洗液/樣品稀釋液（10X ）濃縮，50ml，
6、衍生化試劑 12ml
7、1瓶16mL底物（TMB）
8、1 瓶12mL終止液.
步驟
1、在對應的微孔中加入25 μL 標準或衍生化的樣品。*好做重復。
2、用排槍在每個孔中都加入100μL酶標記物、然后用紙片蓋住微孔，輕輕震蕩微孔板30秒使孔中的液體混勻。
3、在室溫下孵育30分。
4、將孔里的液體倒入合適的容器中，每個微孔至少加入250μL、1×洗液，然后棄掉洗液到合適的容器中，重復洗3次，共四次。在一層厚的吸水紙上拍板，去掉殘留的洗液。
5、使用排槍在每個孔中加入100μL底物顯色液，然后用紙片蓋住微孔，輕輕震蕩微孔板30秒使孔中的液體混勻。在室溫孵育20分。盡量使其不見光。
6、每孔加入100μL終止液。
7、在加入終止液15分鐘時間內，用酶標儀在450nm 下讀取每個孔的吸光度值（OD）。 |
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