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供應GST pull down實驗服務

供應GST pull down實驗服務_廣州輝駿生物科技股份有限公司_供應GST pull down實驗服務

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公　司：廣州輝駿生物科技股份有限公司

發(fā)布時間：2024年08月08日

有效期：2025年02月07日

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詳細說明

GST pull down實驗原理●

GST pull down是將GST融合蛋白作為探針固化到凝膠柱上，與溶液中的目的蛋白相結合。可用來確定融合（或探針）蛋白與未知（或靶）蛋白間的新的相互作用。先將體外表達的GST融合蛋白結合到谷胱甘肽Beads上，再將靶蛋白-GST-Beads和細胞裂解液孵育，這樣互作蛋白便一起吸附在Beads上。

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18927549347

常見的蛋白相互作用方法主要有免疫共沉淀（Co-IP）、pull down、酵母雙雜交、熒光雙分子互補（BiFC）、熒光共定位等。

pull down技術將目標蛋白進行體外原核表達，使標簽蛋白（GST或His等）與目標蛋白融合表達，借助標簽的親和介質將目標蛋白純化出來，可以不受抗體、物種限制，比較輕松的獲得目標蛋白的結合蛋白，還可以通過外源同時表達目標蛋白和待測蛋白，確定它們是否發(fā)生直接的相互作用，

Co-IP技術采用目標蛋白的抗體捕獲樣本中的目標蛋白及其互作蛋白復合物，反應的是體內真實的生理結合，但是不能顯示這些相互作用是直接還是間接的；另外合適的免疫共沉淀抗體是決定實驗成功的關鍵，有些蛋白沒有可用的IP抗體，無法進行內源性Co-IP實驗；

熒光雙分子互補（BiFC）技術將目標蛋白和待測蛋白分別與GFP的兩個片段融合表達，轉染細胞后，2個蛋白的結合使得GFP兩個片段空間上靠近，從而發(fā)出綠色熒光，該技術觀測直觀，操作簡便，但空間分辨率大約 250nm，對于蛋白質相互作用來說依然是個相當遠的距離，因此位置上靠近但并未結合的蛋白也可能顯示陽性結果，假陽性率較高；另外該技術可以驗證蛋白間的相互作用，但不能篩選未知互作蛋白。

熒光共定位技術依靠熒光確定蛋白質具有相同定位，用于輔助證明而非直接證明細胞內蛋白間的相互作用。

以上方法通常相互補充，多種方法共同確定蛋白質間的相互作用，也能更大程度的

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