閃晶公司有擴增性能好、保真性能強的各種 PCR 反應試劑,可滿足您對各種模板進行 PCR 擴增的要求。
樣品要求:
請您提供模板(質粒、基因組 DNA 、 PCR 產物等) 10 ml 以上(標明濃度 ) 、上下游引物(通常提供 0.2OD 以上 ) 、擴增產物的用途等。
提供結果:
PCR 擴增產物、電泳照片差減雜交PCR
差減雜交(Subtractive hybridization)的原理非常簡單,首先將RNA反轉錄為雙鏈cDNA,稱為tester(含有目的基因);對照RNA(不含目的基因)同樣處理,產生cDNA為driver,微量的tester和過量的driver在合適的條件下雜交,tester中和driver中相同的基因雜交子就被除去,在tester中獨特的基因被富集,通過PCR方法擴增出來,得到差減庫,擴增產物可以通過T載體直接克隆和測序分析。在探討兩個相關組織或兩個關聯過程中基因表達差異的情況,通過該方法可以獲得某些基因在某一樣品中表達,而在對應的樣品中不表達或表達量很低。
該方法也可以用于基因組特異片段的篩選,差別在于前者用mRNA為實驗材料,后者用基因組DNA或其它可比樣品的DNA為材料,兩者的后半部分實驗內容完全相同,前者得到的主要是差異表達的基因,后者得到的主要是差異片段。
客戶需提供兩個樣品確實存在顯著差異的證據,并告知打算得到哪個樣品中被上調或下調的基因。如果同時想知道上調和下調的基因,則相當于兩個服務,價格加倍。
實驗結束后我們會提供篩選到的含有差異基因的質粒,用兩個樣品制備的cDNA制備的探針對篩選到的差異克隆進行Southern鑒定的圖片一幅,以及簡明實驗步驟。 |
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